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Xten™ Mab Single B兔單克隆抗體開發案例

發表時間:2022-10-26 訪問次數:710

  一、概述

  兔單抗與傳統的雜交瘤鼠單抗相比具有更好的抗原識別功能。由于兔骨髓瘤細胞株受專利保護,無法利用雜交瘤技術開發兔單抗,普健生物建立了噬菌體展示抗體文庫技術平臺以及新型的Xten™ Mab Single B兔單克隆抗體開發技術平臺。

  單個B細胞抗體制備技術是近年來新發展的一類快速制備單克隆抗體的技術,是根據每一個B細胞只含有一個功能性重鏈可變區DNA序列和一個輕鏈可變區DNA序列,以及每一個B細胞只產生一種特異性抗體的特性,從免疫動物脾組織或外周血中分離抗原特異性B細胞,通過單細胞PCR技術從分泌抗體的單個B細胞中擴增IgG重鏈和輕鏈可變區基因,然后在哺乳動物細胞內表達并獲得具有生物活性的單克隆抗體。

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圖1. XtenTM Mab 兔單克隆抗體開發流程

  二、服務內容

服務項目 客戶提供 服務內容 服務周期 交付內容
XtenTM Mab 兔單克隆抗體開發 抗原序列

抗原制備

動物免疫

脾細胞分離及陽性B細胞篩選

陽性克隆抗體可變區擴增及測序分析

重組抗體表達及純化

20-24周

100µg/株單抗

pUC質粒

3株最優的抗體序列

技術服務報告

  案例展示:

  利用B細胞分選富集策略,在流式分選設備的支持下,有效富集抗原特異性B細胞,提高B細胞體外培養的成活率,保留B細胞的多樣性,可開發出不同應用需求的抗體。

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圖2.XtenTM Mab 兔單克隆抗體開發之B細胞篩選

  使用普健生物XtenCHOTM高密度瞬轉表達系統,體外重組表達部分陽性抗體,純化后進行功能驗證。

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圖3. XtenTM Mab 兔單克隆抗體開發之重組抗體表達

  重組表達純化后的抗體可進行ELISA、WB、流式等功能性分析。

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  A B C D
EC50(ng/ml) 6.897 145 15.48 23.43

圖4.XtenTM Mab 兔單克隆抗體開發之重組抗體ELISA檢測結果

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