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昆蟲桿狀病毒表達系統

服務簡介

昆蟲桿狀病毒表達系統 (BEVS) 是一種利用桿狀病毒作為外源基因的載體,通過感染昆蟲細胞或者昆蟲幼蟲來表達外源蛋白的系統,是重要的真核表達系統之一。

1.昆蟲桿狀病毒表達系統的優勢:

a.桿狀病毒安全性好

b.攜帶外源基因的容量大

c.外源目的蛋白質表達水平高

d.表達的真核基因產品可以進行正確的折疊與修飾,因而具有良好的生物活性。

2.與哺乳細胞相比昆蟲表達系統的優勢:

a.培養條件相對簡單,不需要CO2

b.不容易被細菌污染

c.能進行蛋白翻譯后糖基化修飾

d.大規模生產條件簡單,更易獲得大量蛋白

常見的表達載體及特征

載體 特征
pFastBac1

Strong AcMNPV polyhedrin (PH) promoter for high level protein expression Large multiple cloning site for simplified cloning

pFastBacHT

Strong polyhedrin (PH) promoter for high-level protein expression

N-terminal 6His tag for purification of recombinant fusion proteins using metal-chelating resin and a TEV protease cleavage site for removal of the 6His tag

following protein purification

Vector supplied in 3 reading frames for simplified cloning

pFastBacDual

Two strong baculovirus promoters (PH and p10) to allow simultaneous expression of two proteins

Two large multiple cloning sites for simplified cloning

 

常見的表達細胞及特征

細胞 來源 用途
Sf9 Sf9細胞系克隆分IPLBSF21-AE(Sf21),來源于秋蠅蠕蟲(草地夜蛾)蛹的卵巢組織

適于轉染、純化、生產高滴度病毒、鋪板以及表達重組蛋白

Sf21

Sf21細胞衍生于IPLBSF-21細胞系,也來源于秋蠅蠕蟲(草地夜蛾)蛹的卵巢組織

也適于轉染、純化、生產高滴度病毒、鋪板以及表達重組蛋白。在一些結構上Sf21細胞可能比Sf9細胞表達蛋白量高

Hi5

Hi5細胞系源于博伊斯湯普森研究所對植物的研究和源于白菜尺蠖卵巢細胞,粉紋夜蛾細胞

Hi5細胞表達重組病毒性能優越, 經常用于轉染和空斑純化,也適用于表達分泌型重組蛋白

S2

S2是一種果蠅晚期胚胎細胞。其中多為雌性四倍體細胞,也有雙倍體細胞

比較適合重組蛋白的表達

 

服務優勢

1.普健生物利用經典Bac-to-Bac技術,打造了一個快速簡便高效的桿狀病毒表達平臺; 該技術能夠快速地產生重組病毒,而且不需要繁瑣的空斑分析,大大提高了效率。

2.蛋白生產的周期短,通量大??梢詫崿F細胞從小規模培養到大規模發酵的過程,使得蛋白產物甚至可以達到100mg/L的級別。

3.提供免費的病毒粒子擴增和儲存服務,儲存期長達2年。

服務內容

服務項目

客戶提供

服務內容

服務周期

交付內容

昆蟲桿狀病毒表達蛋白

基因序列

載體

基因合成及密碼子優化

載體構建

病毒包裝及擴增

表達純化測試

放大生產及純化

服務報告

6-8 周

蛋白樣品

技術服務報告

案例展示

案例1 昆蟲-桿狀病毒系統表達大蛋白A(272 KD)

  普健采用昆蟲-桿狀病毒表達系統,C端融合6*His標簽表達了大小為272 KD的蛋白A,經過P1代表達測試,病毒擴增后分別轉染Sf細胞和Tn細胞測定MOI,選取最佳表達條件進行P2代表達測試和200ml表達純化,最終得到的蛋白A純度90%,產量5mg/L。

圖1 蛋白A P1代表達純化測試結果( 還原SDS-PAGE )
A.考馬斯亮藍染色. B. WB (ECL發光,抗His標簽抗體).
ø.陰性對照培養基. 1 和 2.轉染的 1和2號克隆. Medium:培養基. NPE. 可溶上清. DPE. 沉淀. +. 陽性對照.

 

圖2.蛋白A 在Sf 和 Tn 細胞中的P2 代表達測試(還原 SDS-PAGE).
考馬斯亮藍染色 Ø.陰性對照. D2-D3. 轉染后天數. +. 陽性對照.

 

圖3.蛋白A 在Sf 和 Tn 細胞中的P2 代表達測試情況-WB驗證(還原 SDS-PAGE ).
Ø.陰性對照. D2-D3. 轉染后天數. +. 陽性對照.

 

圖4.蛋白A純化質檢圖(還原 SDS-PAGE )
A.考馬斯亮藍染色. B. WB (ECL發光;抗His標簽抗體). MW. 分子量標記.

 

案例2 昆蟲-桿狀病毒系統表達G蛋白偶聯受體(蛋白B)

  普健生物采用昆蟲-桿狀病毒表達系統,N端融合10*His和Flag標簽表達了大小為42 KD的G蛋白偶聯受體-蛋白B(7次跨膜區,2個糖基化位點),經過P1代表達測試,病毒擴增后分別轉染Sf細胞和Tn細胞測定MOI,選取最佳表達條件進行P2代表達測試和200 ml表達純化,最終得到的蛋白B用biacore測定了跟配體的親和力,親和力在uM級。

圖1.蛋白B P2代表達純化測試(Sf和Tn細胞).
還原SDS-PAGE及考馬斯藍染色.
Ø.陰性對照.D2-D3.感染后天數.
Medium:培養基.NPE.可溶性上清.DPE.沉淀.

 

圖2 P2代表達測試WB驗證(Sf和Tn細胞;ECL發光法;抗His標簽抗體).
Ø.陰性對照. D2-D3.感染后天數.+.陽性對照.Medium:培養基.NPE.可溶性上清.DPE.沉淀.

 

圖3 蛋白B純化質檢圖(還原SDS-PAGE;考馬斯藍染色)
MW.分子量標記.

 

圖4. 蛋白B跟配體親和力測定結果

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